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猪人工授精最全步骤以及技术要点

猪巴巴 6年前 (2019-03-25) 17951 0

人工授精实验室是很严谨的工作，必须是有据可依，不能单靠直觉和经验来判断。成功管理人工授精实验室，是猪巴巴不断追求的目标，本文涵盖了猪人工授精最全步骤以及技术要点。

公猪的调教

公猪应该在8到10个月大的时候接受训练，大多数公猪可以适应假母台采精，训练的关键是耐心，根据经验，猪巴巴总结了公猪调教口诀。

备制一个采精台，蒙上猪皮诱公来。
表面涂抹荷尔蒙，忽悠公猪爬上台。
不停呼喊上上上，多种刺激凑效快。
初配公猪不懂事，师傅可将徒弟带。
师傅公猪先示范，徒弟公猪隔栏看。
耐心训练三五次，训练成功即告完。
调教公猪重安全，两头公猪勿同栏。
采精处设逃逸口，公猪袭人由此穿。

技术要点：

公猪体型笨重，采精栏一定要铺采精防滑垫，防止公猪爬假母台时滑倒受伤。也可以配合使用公猪诱情剂，引诱公猪爬假母台。采精员区域一般比采精栏低一些，注意不要被公猪踩到手。

采精前实验室准备

磁力搅拌器

采精准备很重要，有关器械把毒消。
稀释液配稍提前，静置一时缓冲要。
稀释浓度须准确，精液渗压恰正好。
冬天保温勿疏忽，冷击精子活不了。

恒温冰箱

技术要点：

蒸馏水和稀释粉的比例大约是1L：1包(50g)，稀释用的水必须是灭菌后的蒸馏水（纯水）。

搅拌时间不少于30分钟，稀释液温度不得超过40℃，搅拌时防止落入杂物。按所需量稀释使用，防止浪费。

稀释后放入水浴锅或加热水槽加温，注意要防止水浴锅里水进入稀释液内，水浴锅的温度保持在35℃~38℃。

建议使用不锈钢的保温杯，不易摔坏，用橡皮圈将采精过滤纸扎在采精杯口。

采精前的保温杯必须保证38℃恒温加热，稀释时使用的容器同样需要38℃恒温加热。

开始给公猪采精

徒手采精

公猪进得采精室，挤压包皮排积尿。
待猪爬上采精台，紧握阴茎莫放掉。
借助阴茎前挺力，顺势前伸茎固牢。
阴茎根部显露时，射精即要开始了。
集精杯口过滤布，囊液凝块过滤掉。
始出精液不可接，色清精少且混尿。
正常精液乳白色，此态精子密度高。
公猪射精两三次，两百毫升不为少。

自动采精系统

技术要点：

目前常见的采精方式有两种，一种是普通采精法，也就是手动采精，另一种则是先进的自动采精，不管是哪种采精方法，都要注意以下技术要点。

采精前要用手将公猪尿液排净（包皮积尿），刚开始射精时的胶状物也要排净。

使用的过滤纸一定不能有杀精成分，不可使用橡胶手套（橡胶有杀精成分）。

采精室温度最好在25℃以上，采精杯要加热到38℃左右，可以减少死精。

射精完全结束后才能松手，未排空的精液会影响下次采精的精液质量。（一般公猪的采精量在200ml，也有少数在500ml的）

射精包括四个阶段：初期精液期、富含精子期、后期精液期、凝胶部分。

初期和后期的精液不要采集，这两个阶段主要成分为血浆，外观呈透明到半透明状；富含精子期的成份外观为白色或米白色，是应该采集的精液；凝胶部分自始自终存在于整个射精过程。通过采精杯上的过滤纸可以将精液与凝胶分离。

第一阶段与第二节段变化明显，而第二与第三阶段是逐渐变化的，当射出的精液变成较白的米白色，就可以开始收集了。相反的，当精液开始出现水样时，停止收集将采精杯拿走。但一定要让公猪完成整个射精过程。

公猪精液检测评估和稀释

猪精子结构

一次完整的采精射精量在200~500ml，精子密度大约2~3亿/ml，精子颜色乳白色或浅灰色，呈云雾状，略带腥味，PH值大约在7.0~7.8之间。

如何评估精子的质量？

猪的精子分头部、颈部和尾部三个主要部分，长度为50～60μm。

采精结束后，原精液应再次过滤杂质，经过天平称重，检测精液的PH值，然后可以通过精子密度仪来检测精子密度，最后通过显微镜观察来看精子活力和畸形率。

电子显微镜
精子活力图
第一次稀释
第二次稀释

精子形态评估
A.正常精子的形态	1-3
B.异常精子的形态	4.窄头 5.头基部狭窄 6.梨形头 7.圆形头 8.巨头 9.小头 10.发育不全 11.偏轴
C.中段的形态	11.正常的中段 12.螺旋状中段 13.中段鞘膜脱落 14.假原生质滴 15.双中段
D.尾部的形态	16.近端原生质滴 17.远端原生质滴 18.单卷尾 19.尾多重卷曲 20.环形卷曲 21.无尾的头

精子形态对照图

技术要点

稀释用的器皿使用前须消毒，用少量稀释液冲洗一遍；
品质检查不合格(活率＜0.7)的精液不能稀释；
精液采集后尽快稀释，原精贮存时间不宜超过30分钟；
稀释时严禁太阳光直射精液，应于较暗处操作；
精液要求等温稀释，以精液为标准，调节稀释液温度；
稀释顺序是稀释液沿杯壁加入到精液中，沿一个方向搅拌混匀；
高倍稀释时先进行低倍稀释，以防 “稀释打击”；
根据精液的品质、输精量和配种母猪头数来确定稀释液总量；
以每个输精剂量30亿/80~100ml来确定稀释倍数；
稀释后要求静置片刻再做精子活率检查；

精液稀释计算公式

制造精液瓶数公式：原精量*密度*活率*(1–畸形率)/容器规格=制造瓶数

制造稀释液使用量公式：制造瓶数*瓶装重量-原精量=所需稀释液量

例如：采精量:250ml，密度:300*106ml，活率:90%，畸形率:10%，瓶装精子含量（80ml/30亿），计算所需稀释液量和制造瓶数。

制造瓶数：250 * 3.5 * 0.9 * ( 1 - 0.1 ) / 30 ≈ 23瓶

所需稀释液量：20 * 80 – 250ml = 1598ml

稀释方法
区分	采精量（稀释后精液量）	所需稀释液量	稀释温度变化
第一次稀释	250ml（采精量）	250ml	35℃~37℃
第二次稀释	500ml	500ml	33℃~35℃
第三次稀释	1000ml	848ml	31℃~33℃
第四次稀释	1848ml	0	29℃~31℃
稀释完成	1848ml	0	25℃左右（实验室室温）

反离子渗透纯水机
纯水机结构图

精液灌装存储与运输

精液的灌装

稀释后精液的常见保存方法有三种：输精瓶、输精管和连续输精袋。其中最常用的是输精瓶，使用输精瓶分装的精液容易导致精子沉淀挤压而死，而扁平的精液管和连续输精袋可以更好的保存精液，其中连续输精袋是全自动精液灌装机必备的。

第一代：输精瓶
第二代：精液管
第三代：连续精液袋

上面讲到的精液保存方式对应着三种常见的精液灌装方法，最原始的是手动灌装，其次是半自动精液灌装机，最先进的是全自动精液灌装机。

手动灌装机
半自动灌装机
全自动精液灌装机

精液灌装与存储对比
灌装形式分类	第一代	第二代	第三代
灌装设备要求	手动灌装，无需设备	自动灌装+手动封口	全自动灌装+封口
自动化程度	操作麻烦，产量低	操作简易，全自动设备可生产1000剂/小时	操作简易，全自动设备可生产1800剂/小时
对精子的影响	精子细胞容易堆积，宜侧放，需要频繁转动	精子细胞堆积较少，也需要经常转动	精子细胞堆积很少，无需经常翻动
运输情况	不适合运输	适合运输	适合运输
适合的用户	小型猪场	大型猪场或公猪站	大型猪场、公猪站和人工授精中心

一般来说，储存的精液袋每天翻转一次，精液瓶每天翻转两次，慢慢转动精液瓶几圈，晃动稀释剂里沉淀的精液细胞。

实验室里主要使用恒温冰箱来储存精液，运输主要使用车载恒温冰箱或车载固定两用恒温冰箱。

车载固定两用
实验室用恒温冰箱

精液保存要求

精液需缓慢降温，室温存放1~2h，实验室温度太低可使用纱布包裹。注意冰箱内温度的变化防止温度升高或降低，减少保存箱开关次数，以减少对精子的影响。

每12h将精液摇匀1次，要轻缓均匀，使用前检查活率，活率小于60%的精液应弃之，用稀释液保存的精液，应尽快用完.

人工授精实验室设备的清洗

1、一般清洗

工作结束后，关闭设备电源。用保鲜膜封口剩余的稀释液，放入冰箱保存。用湿毛巾将操作台擦干净。清洗烧杯和玻璃棒，使用专用的清洗剂清洗干净器材，再用蒸馏水清洗两次，最后开口倒置放在毛巾上。

清洗温度计，跟玻璃制品一样冲洗，最后用干燥毛巾擦干。检查所有器材（包括瓶子、盖子等等）。补充第二天实验所需的器材。用酒精擦拭消毒操作台。

2、设备灭菌

如果条件允许，所有的烧杯和玻璃棒都应进行消毒。将清洗过的设备放入灭菌器的架子里。确定灭菌容器内有一定的蒸馏水。打开灭菌设备达到设定温度，灭菌时间20min即可。

将烧杯和玻璃器皿从灭菌器内取出，完全干燥后，放入储存柜里。每两周清理一次灭菌器，并更换容器内的蒸馏水。

人工授精（输精）

发情的检查

判断母猪发情的方法多种多样，无论是哪种方法，都需要配种员有丰富的经验，一般来说母猪的发情周期在21天左右，仔猪断奶后3-7天发情。

母猪的发情周期可分为发情前期、发情期、发情后期，母猪只有在发情期才会出现静力反应，出现这种行为的母猪可以进行输精了。

现在猪场常见的查情方法是使用公猪检查，看看阴道是否红涨有粘液，用手按压母猪，看母猪是否有静立反应。

发情检查表
	发情前期	发情期			发情后期
静立反应	按压无静立反应	按压背部有静立反应			无静立反应
观察阴道	阴道红肿	阴道粉色，红肿消退			灰白色无肿胀
观察粘液	粘稠或无粘液	粘液多，呈水样			粘液消失
行为举止	焦躁，食欲减退	愿意接受爬跨			恢复正常
持续时间	1-3天	一阶段：公猪反应 8-12小时	允许饲养员爬跨 24-36小时	二阶段：公猪反应 8-12小时	直到下次发情
是否能人工授精	否	否	是	否	否